植物病害是制約農(nóng)業(yè)與畜牧業(yè)生產(chǎn)的核心因素之一。據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）統(tǒng)計(jì)，全球每年因植物病害導(dǎo)致的糧食減產(chǎn)達(dá)10%-30%，直接經(jīng)濟(jì)損失超千億美元。同時(shí)，飼料作物（如玉米、苜蓿）的病害感染會(huì)導(dǎo)致飼料品質(zhì)下降，間接影響畜牧業(yè)養(yǎng)殖效益，形成“種植-養(yǎng)殖”產(chǎn)業(yè)鏈的連鎖損失。

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）基于抗原-抗體特異性結(jié)合原理，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，而酶標(biāo)儀作為ELISA檢測(cè)的核心設(shè)備，其性能直接決定檢測(cè)效率與精度。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標(biāo)儀憑借寬波長(zhǎng)檢測(cè)范圍、高靈敏度及自動(dòng)化批量檢測(cè)功能，在醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域已廣泛應(yīng)用，但在農(nóng)業(yè)植物病害檢測(cè)中的系統(tǒng)性研究較少。

一、材料與方法

（一）試驗(yàn)材料

1、供試植物與病害：小麥感染小麥條銹病、番茄感染番茄晚疫病、玉米感染玉米大斑病，均采自山東農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)田。

2、試劑：小麥條銹病、番茄晚疫病、玉米大斑病特異性抗體，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記二抗，TMB顯色液，包被緩沖液，洗滌液。

3、儀器：博清生物酶標(biāo)儀、高速離心機(jī)、移液器、恒溫培養(yǎng)箱。

（二）檢測(cè)方法

1、樣品處理

取感染病害的植物葉片組織0.5g，加入5mL PBS緩沖液（pH7.4），研磨成勻漿后，4℃、8000r/min 離心10min，取上清液作為待測(cè)樣品。

健康植物葉片按相同方法處理，作為陰性對(duì)照；已知濃度的病害抗原標(biāo)準(zhǔn)品（0.001-100ng/mL）作為陽(yáng)性對(duì)照。

2、ELISA檢測(cè)流程

包被：將特異性抗體用包被緩沖液稀釋至1μg/mL，每孔加入100μL，4℃孵育12h后，用洗滌液洗滌3次，每次3min。

封閉：每孔加入200μL 5%脫脂奶粉溶液，37℃孵育1h，洗滌步驟同上。

加樣：分別加入待測(cè)樣品、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照各100μL，37℃孵育1h，洗滌步驟同上。

加二抗：加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000稀釋），每孔100μL，37℃孵育1h，洗滌步驟同上。

顯色：每孔加入100μL TMB顯色液，37℃避光孵育15min，加入50μL 2M H?SO?終止反應(yīng)。

3、酶標(biāo)儀檢測(cè)與數(shù)據(jù)處理

采用博清生物酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔吸光度（OD值），以陽(yáng)性對(duì)照OD值/陰性對(duì)照OD值≥2.1判定為陽(yáng)性（即病害感染）。

每個(gè)樣品設(shè)置3次重復(fù)，數(shù)據(jù)采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行方差分析，Origin 2021軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線與結(jié)果圖表。

二、結(jié)果與分析

（一）檢測(cè)靈敏度與特異性

1、靈敏度：通過(guò)測(cè)定不同濃度抗原標(biāo)準(zhǔn)品的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（R2=0.998）。結(jié)果顯示，博清生物酶標(biāo)儀對(duì)3種病害的最低檢測(cè)濃度均為0.01ng/mL，可在病害感染早期（葉片未出現(xiàn)明顯病斑時(shí)）實(shí)現(xiàn)陽(yáng)性檢測(cè)，比傳統(tǒng)目測(cè)法提前3-5天發(fā)現(xiàn)病害。

2、特異性：分別用3種病害的抗體與其他病原（如小麥白粉病、番茄早疫?。悠方徊娣磻?yīng)，結(jié)果顯示交叉反應(yīng)率均低于1.5%，特異性準(zhǔn)確率達(dá)98.5%以上，表明該方法對(duì)目標(biāo)病害的識(shí)別具有高度專一性。

（二）與傳統(tǒng)檢測(cè)方法的對(duì)比

通過(guò)檢測(cè)相同批次（96個(gè)）樣品，對(duì)比博清酶標(biāo)儀檢測(cè)法與傳統(tǒng)方法的性能差異，博清酶標(biāo)儀檢測(cè)法在檢測(cè)效率、成本控制及批量處理能力上顯著優(yōu)于傳統(tǒng)方法，同時(shí)準(zhǔn)確率接近PCR法，綜合性價(jià)比最高。

（三）穩(wěn)定性與重復(fù)性

對(duì)同一陽(yáng)性樣品進(jìn)行10次重復(fù)檢測(cè)，博清酶標(biāo)儀測(cè)定的OD值變異系數(shù)（CV）為1.2%-1.8%，低于3%的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；不同批次（間隔7天）檢測(cè)的CV值為2.1%-2.5%，表明該儀器檢測(cè)結(jié)果具有良好的穩(wěn)定性與重復(fù)性，適合長(zhǎng)期批量檢測(cè)應(yīng)用。

三、討論

本研究通過(guò)建立基于博清生物酶標(biāo)儀的植物病害ELISA檢測(cè)體系，證實(shí)該儀器可有效解決傳統(tǒng)檢測(cè)方法“早期檢測(cè)難、效率低、成本高”的痛點(diǎn)，其核心優(yōu)勢(shì)源于兩方面：

（一）技術(shù)原理適配性：ELISA方法的抗原-抗體特異性結(jié)合原理，搭配博清酶標(biāo)儀的高靈敏度光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，可捕捉病害早期微量病原物的信號(hào)，實(shí)現(xiàn)“早發(fā)現(xiàn)、早防控”，減少農(nóng)藥濫用與產(chǎn)量損失。

（二）設(shè)備性能針對(duì)性：博清酶標(biāo)儀的96孔批量檢測(cè)設(shè)計(jì)、快速光學(xué)讀數(shù)功能（≤10秒/96孔），契合農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中“大面積、多樣本”的檢測(cè)需求，同時(shí)中等操作復(fù)雜度與成本優(yōu)勢(shì)，使其可下沉至基層農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站及規(guī)?；N植基地。

與國(guó)內(nèi)外同類研究對(duì)比，本研究首次系統(tǒng)驗(yàn)證了博清生物酶標(biāo)儀在多種農(nóng)作物病害檢測(cè)中的適用性，填補(bǔ)了該品牌儀器在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用研究的空白。但研究仍存在局限：目前僅針對(duì)3種常見(jiàn)病害，對(duì)部分罕見(jiàn)或新發(fā)病害的檢測(cè)體系尚未建立；后續(xù)可結(jié)合膠體金標(biāo)記技術(shù)，進(jìn)一步簡(jiǎn)化操作流程，開(kāi)發(fā)“現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)+實(shí)驗(yàn)室精準(zhǔn)驗(yàn)證”的分級(jí)檢測(cè)模式。

基于博清生物酶標(biāo)儀的ELISA檢測(cè)方法，對(duì)小麥條銹病、番茄晚疫病等植物病害的檢測(cè)靈敏度達(dá)0.01ng/mL，特異性準(zhǔn)確率超98.5%，可實(shí)現(xiàn)病害早期精準(zhǔn)檢測(cè)。

該方法相較于傳統(tǒng)檢測(cè)手段，在檢測(cè)效率、成本控制及批量處理能力上具有顯著優(yōu)勢(shì)，綜合性能均衡，適合農(nóng)業(yè)與畜牧業(yè)生產(chǎn)中的規(guī)?；瘧?yīng)用。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標(biāo)儀為植物病害防控提供了高效可靠的技術(shù)工具，對(duì)保障糧食安全、提升飼料作物品質(zhì)、推動(dòng)“種植-養(yǎng)殖”產(chǎn)業(yè)鏈綠色發(fā)展具有重要實(shí)踐意義。