疫苗作為預(yù)防傳染病的核心生物制品，其生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制直接關(guān)系到接種安全性與免疫有效性?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》明確規(guī)定，CHO、Vero細(xì)胞來源的疫苗宿主殘留DNA含量需控制在10-100pg/劑以內(nèi)，而病毒載量、外源核酸污染等指標(biāo)的精準(zhǔn)檢測(cè)則依賴于高質(zhì)量的核酸提取技術(shù)。傳統(tǒng)手動(dòng)核酸提取方法存在操作繁瑣、效率低下、結(jié)果重復(fù)性差等問題，且易因人為操作引入交叉污染，難以滿足疫苗規(guī)模化生產(chǎn)中的高通量質(zhì)控需求。

一、材料與方法

（一）實(shí)驗(yàn)材料

1、儀器設(shè)備

博清生物核酸提取儀；熒光定量PCR儀；紫外分光光度計(jì)；臺(tái)式高速離心機(jī)。對(duì)照儀器核酸提取儀。

2、試劑與樣本

博清生物磁珠法核酸提取試劑盒V；qPCR預(yù)混液；Vero細(xì)胞DNA標(biāo)準(zhǔn)品；PRRSV RNA標(biāo)準(zhǔn)品；無核酸酶水。實(shí)驗(yàn)樣本來源于狂犬病疫苗生產(chǎn)工藝節(jié)點(diǎn)：①細(xì)胞培養(yǎng)上清；②純化中間產(chǎn)物；③成品疫苗，均由某生物制品企業(yè)提供。

3、質(zhì)控品設(shè)置

陽性對(duì)照：含100pg/μL Vero細(xì)胞DNA的模擬樣本；陰性對(duì)照：無核酸酶水；空白對(duì)照：僅添加提取試劑的反應(yīng)體系。

（二）實(shí)驗(yàn)方法

1、核酸提取流程優(yōu)化

基于疫苗樣本特性，通過博清生物核酸提取儀的程序編輯功能定制提取方案：裂解溫度65℃（10分鐘），結(jié)合溫度室溫（5分鐘），洗滌緩沖液分3次添加，洗脫溫度70℃（2分鐘），洗脫體積50μL。程序設(shè)置完成后通過U盤導(dǎo)出備份，確保實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。儀器運(yùn)行前啟動(dòng)UV消毒功能30分鐘，操作過程中嚴(yán)格遵循安全門聯(lián)鎖機(jī)制（開門自動(dòng)暫停程序）。

3、數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以“均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

（一）核酸提取效率與純度

博清生物核酸提取儀對(duì)疫苗不同節(jié)點(diǎn)樣本的核酸提取回收率均高于90%，其中細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本回收率達(dá)95.2%±2.3%，顯著高于手動(dòng)提取法（78.3%±4.5%，P<0.01），與對(duì)照儀器（94.8%±2.1%）無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。提取產(chǎn)物純度方面，DNA樣本A260/A280比值為1.82±0.05，RNA樣本為1.93±0.04，均符合下游檢測(cè)的純度要求（DNA1.7-2.0，RNA1.8-2.1），且明顯優(yōu)于手動(dòng)提取法（DNA1.65±0.08，RNA1.72±0.07）。

（二）污染控制效果

未啟動(dòng)UV消毒時(shí)，陽性樣本相鄰孔的交叉污染率為3.2%；經(jīng)15分鐘UV消毒后，污染率降至0.8%；消毒30分鐘后，污染率進(jìn)一步降至0.1%以下，且空白對(duì)照均未檢出核酸信號(hào)。儀器的安全門聯(lián)鎖設(shè)計(jì)可有效避免操作過程中的氣溶膠污染，結(jié)合內(nèi)置空氣過濾系統(tǒng)，形成了多重污染防控體系。

（三）下游qPCR兼容性

以博清生物核酸提取儀提取的核酸為模板進(jìn)行qPCR擴(kuò)增，其擴(kuò)增效率為98.6%±1.2%，相關(guān)系數(shù)R2>0.99，Ct值CV為1.8%±0.3%；而手動(dòng)提取產(chǎn)物的擴(kuò)增效率為89.3%±2.5%，Ct值CV為4.2%±0.6%。表明該儀器提取的核酸抑制劑殘留少，可滿足疫苗質(zhì)控中高靈敏度核酸檢測(cè)的需求。

三、討論

疫苗生產(chǎn)質(zhì)控的核心目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵指標(biāo)的精準(zhǔn)、高效監(jiān)測(cè)，而核酸提取作為檢測(cè)前處理的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其技術(shù)水平直接決定質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的可靠性。本研究證實(shí)，博清生物核酸提取儀通過以下技術(shù)優(yōu)勢(shì)適配疫苗質(zhì)控需求：

在效率與純度優(yōu)化方面，該儀器采用磁珠法分離技術(shù)，結(jié)合獨(dú)立加熱模塊的精準(zhǔn)溫控（裂解/洗脫溫度可自定義），實(shí)現(xiàn)了病毒核酸與宿主殘留核酸的高效分離。其對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本的回收率超95%，純度比值穩(wěn)定在理想?yún)^(qū)間，這與儀器的多檔可調(diào)振蕩混合系統(tǒng)密切相關(guān)——通過優(yōu)化振蕩強(qiáng)度可促進(jìn)磁珠與核酸的充分結(jié)合，減少雜質(zhì)吸附。相較于傳統(tǒng)手動(dòng)方法，自動(dòng)化操作不僅提升了提取效率，更通過標(biāo)準(zhǔn)化流程降低了人為誤差，這與疫苗質(zhì)控中“結(jié)果可追溯、過程可重復(fù)”的GMP要求高度契合。

在高通量與靈活性平衡方面，博清生物核酸提取儀的多樣本靈活通量設(shè)計(jì)，可適配疫苗研發(fā)從小試到中試的不同階段需求：小批量樣本可通過單孔獨(dú)立提取減少試劑浪費(fèi)，中批量樣本則通過同步處理縮短檢測(cè)周期。其15-40分鐘的提取耗時(shí)與同類儀器相比具有明顯優(yōu)勢(shì)，尤其適用于疫苗生產(chǎn)中“實(shí)時(shí)質(zhì)控”的時(shí)間需求——如細(xì)胞培養(yǎng)過程中病毒載量的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，可通過快速提取-檢測(cè)反饋調(diào)整培養(yǎng)參數(shù)。此外，儀器支持100組以上程序存儲(chǔ)及U盤導(dǎo)入導(dǎo)出功能，便于實(shí)驗(yàn)室針對(duì)不同疫苗類型（如滅活疫苗、重組蛋白疫苗）建立專屬提取方案，提升了方法學(xué)驗(yàn)證的效率。

在污染控制安全性方面，UV消毒與安全門聯(lián)鎖的雙重防護(hù)設(shè)計(jì)，有效解決了疫苗質(zhì)控中“交叉污染導(dǎo)致假陽性”的關(guān)鍵痛點(diǎn)。本研究中30分鐘UV消毒可使污染率降至0.1%以下，優(yōu)于部分同類儀器的污染控制效果，這對(duì)于低濃度殘留核酸檢測(cè)至關(guān)重要。同時(shí)，儀器的封閉性操作減少了氣溶膠擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)，符合生物安全實(shí)驗(yàn)室的操作規(guī)范。

在法規(guī)符合性方面，博清生物核酸提取儀的性能參數(shù)均滿足《生物制品生產(chǎn)檢定用儀器設(shè)備校準(zhǔn)指南》要求，其提取產(chǎn)物的高純度特性可直接適配qPCR、數(shù)字PCR等精密檢測(cè)技術(shù)。

本研究的局限性在于未涵蓋mRNA疫苗等新型疫苗類型的提取驗(yàn)證，未來可進(jìn)一步拓展樣本范圍，評(píng)估儀器對(duì)RNA完整性的保護(hù)效果——如通過RIN值測(cè)定驗(yàn)證提取過程中RNA降解情況。此外，可結(jié)合LIMS系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)儀器操作數(shù)據(jù)的自動(dòng)上傳，進(jìn)一步強(qiáng)化質(zhì)控過程的數(shù)字化管理。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的核酸提取儀通過高效的核酸提取性能、優(yōu)異的重復(fù)性、可靠的污染控制及靈活的通量設(shè)計(jì)，可有效滿足疫苗生產(chǎn)全流程的質(zhì)控需求，尤其適用于宿主殘留核酸檢測(cè)、病毒載量監(jiān)控等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。其自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化的技術(shù)特點(diǎn)不僅提升了質(zhì)控檢測(cè)的效率與準(zhǔn)確性，更助力疫苗研發(fā)實(shí)驗(yàn)室建立合規(guī)的質(zhì)量控制體系。隨著疫苗技術(shù)的不斷發(fā)展，該類儀器有望通過與下游檢測(cè)技術(shù)的深度整合，進(jìn)一步推動(dòng)疫苗質(zhì)控的“全流程自動(dòng)化”進(jìn)程。