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感染性疾病作為全球公共衛(wèi)生的重大挑戰(zhàn)，其導致的死亡占全球總死亡人數的1/3以上，嚴重威脅人類健康與公共衛(wèi)生安全。病毒載量作為評估病原體復制活性、疾病進展程度及治療效果的核心指標，在感染性疾病診療中具有不可替代的作用，例如HIV病毒載量監(jiān)測可直接指導抗病毒治療方案調整，HBV病毒載量動態(tài)變化與肝硬化、肝癌發(fā)生風險密切相關。

傳統(tǒng)檢測方法如病原體培養(yǎng)、血清學檢測等存在耗時久、靈敏度低、難以定量等局限性，無法滿足現代醫(yī)學“早診斷、準治療、快防控”的需求。熒光定量PCR（qPCR）技術通過實時監(jiān)測核酸擴增過程中的熒光信號變化，實現了病原體核酸的定性與定量分析，具有靈敏度高、特異性強、檢測快速等優(yōu)勢，已成為臨床病毒載量監(jiān)測的“黃金標準”。博清生物科技（南京）有限公司自主研發(fā)的BOD-16PE熒光定量PCR儀，融合了實時動態(tài)精準溫控技術與多通道熒光檢測系統(tǒng)，針對移動檢測、現場篩查等場景進行優(yōu)化設計，兼具高通量與便攜性特點。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑

試驗儀器：博清生物熒光定量PCR儀（型號BOD-16PE），配備7寸觸控屏、4 色熒光檢測通道，16孔反應模塊；對照儀器為某品牌熒光定量PCR儀。

試驗試劑：HBV、SARS-CoV-2、HIV核酸檢測試劑盒（含引物、TaqMan探針、反轉錄酶、Taq酶等）；病毒核酸提取試劑盒（磁珠法）；系列濃度病毒核酸標準品（102~10? copies/μL）。

（二）試驗方法

1、檢測體系建立

按照試劑盒說明書配置25μL PCR反應體系：2×qPCR Mix 12.5μL，上下游引物（10μmol/L）各0.5μL，熒光探針（10μmol/L）0.3μL，模板核酸5μL，無酶純水補至25μL。反應程序設置：逆轉錄（針對RNA病毒）42℃ 15min，預變性95℃ 3min；95℃ 10s，60℃ 30s，40個循環(huán)，每個循環(huán)結束后收集熒光信號。

2、靈敏度檢測

將HBV、SARS-CoV-2、HIV標準品分別進行10倍梯度稀釋，濃度范圍為101~10? copies/μL，每個濃度設置3個復孔，同時設置陰性對照。采用博清生物熒光定量PCR儀進行檢測，以3個復孔均能檢出熒光信號且Ct值穩(wěn)定的最低濃度為最低檢測限（LOD）。

3、線性范圍與擴增效率分析

取102~10?copies/μL的系列標準品，每個濃度設置3個復孔，進行qPCR檢測。以標準品濃度的對數為橫坐標，對應的Ct值為縱坐標，繪制標準曲線，計算相關系數（R2）；根據公式E=（10^(-1/slope)-1）×100%計算擴增效率，其中slope為標準曲線斜率。

4、重復性分析

選取中（10?copies/μL）、高（10?copies/μL）兩個濃度的標準品，每個濃度設置8個復孔，在同一批次內進行檢測（批內重復性）；連續(xù)5天重復檢測同一濃度標準品（批間重復性），計算Ct值的變異系數（CV），CV=（標準差/平均值）×100%。

二、結果

（一）靈敏度檢測結果

博清生物熒光定量PCR儀對HBV、SARS-CoV-2和HIV的最低檢測限分別為10copies/μL、15copies/μL和20copies/μL，均低于臨床常規(guī)檢測閾值（50copies/μL），能夠有效檢出低載量病毒樣本。

（二）線性范圍與擴增效率

在102~10?copies/μL濃度范圍內，三種病毒的標準曲線相關系數（R2）均≥0.995，擴增效率為90.2%~104.8%，符合臨床定量檢測要求。典型標準曲線顯示，Ct值與病毒核酸起始拷貝數的對數呈良好線性關系。

（三）重復性分析結果

批內重復性試驗中，中、高濃度標準品的Ct值變異系數（CV）均＜3%；批間重復性試驗中，CV值均＜5%，表明博清生物熒光定量PCR儀的檢測結果穩(wěn)定性良好。

（四）臨床樣本驗證結果

120例臨床樣本中，博清生物熒光定量PCR儀與對照熒光定量PCR儀的檢測總符合率為96.7%（116/120），其中HBV樣本符合率 95.0%（38/40），SARS-CoV-2樣本符合率 97.5%（39/40），HIV樣本符合率97.5%（39/40）。Kappa檢驗結果顯示，兩種儀器的Kappa值為0.94，一致性極強。

三、討論

病毒載量監(jiān)測是感染性疾病精準診療的核心環(huán)節(jié)，其檢測結果的準確性直接影響治療方案制定、療效評估及預后判斷。熒光定量PCR技術作為病毒載量檢測的主流方法，通過實時監(jiān)測熒光信號與核酸擴增的同步關系，實現了對病毒核酸的精準定量，其性能優(yōu)劣取決于儀器的溫控精度、光學檢測系統(tǒng)靈敏度及軟件數據處理能力。

本研究結果顯示，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光定量PCR儀在病毒載量監(jiān)測中表現出優(yōu)異的性能：其一，靈敏度高，對HBV、SARS-CoV-2和HIV的最低檢測限分別低至10、15和20copies/μL，能夠有效捕捉感染初期或治療后低載量殘留病毒，為“功能性治愈”評估提供技術支持，這一性能與進口儀器相當，且滿足WHO對病毒載量檢測的靈敏度要求；其二，線性范圍寬（102~10?copies/μL），相關系數≥0.995，擴增效率穩(wěn)定在90%~105%，確保了不同濃度病毒樣本檢測結果的準確性，尤其適用于病毒復制活躍期高載量樣本與治療后低載量樣本的動態(tài)監(jiān)測；其三，重復性良好，批內與批間CV值均＜5%，符合臨床實驗室質量控制標準，避免了因檢測波動導致的診療誤判；其四，臨床一致性強，與進口儀器的總符合率達96.7%，Kappa值0.94，表明該儀器可有效替代進口設備用于臨床常規(guī)病毒載量檢測。

除核心檢測性能外，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光定量PCR儀的設計優(yōu)勢進一步拓展了其應用場景。該儀器采用7寸觸摸屏與菜單式導航界面，無需連接PC即可獨立操作，降低了對實驗室環(huán)境的要求；16孔反應模塊兼容八連排管與單管，兼顧了檢測通量與樣本靈活性；體量輕盈的便攜設計使其適用于移動實驗室、現場篩查等場景，在突發(fā)疫情防控中具有重要價值。此外，該儀器采用長壽命免維護LED光源與4色熒光檢測通道，可滿足多種病原體聯合檢測需求，如呼吸道多病毒同步篩查，符合現代醫(yī)學“一站式檢測”的發(fā)展趨勢。

當前，病毒載量檢測面臨的主要挑戰(zhàn)包括低拷貝樣本定量準確性、抑制物干擾及檢測時效性等問題。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光定量PCR儀通過優(yōu)化溫控系統(tǒng)（快速升溫速率與精準控溫精度）減少了非特異性擴增，結合TaqMan探針的特異性識別，有效降低了樣本抑制物的干擾；檢測全程僅需2~3小時，較傳統(tǒng)培養(yǎng)方法（3~7天）大幅縮短了檢測時間，為感染性疾病的早期診斷與及時治療提供了保障。

本研究的局限性在于樣本量相對有限，且未涉及罕見病原體及變異株的檢測性能評估。未來可進一步擴大樣本規(guī)模，探討該儀器在耐藥基因聯合檢測、新型病原體篩查中的應用；同時可結合數字PCR技術，優(yōu)化低拷貝樣本的定量算法，進一步提升檢測精度。

綜上所述，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光定量PCR儀在病原體核酸定量檢測與病毒載量監(jiān)測中表現出高靈敏度、高特異性、良好重復性及臨床一致性，且具備便攜操作、高效快速等優(yōu)勢，為感染性疾病的診療與防控提供了可靠的國產技術方案，具有廣闊的臨床應用前景。