移液器作為微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的核心工具，其移液準(zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，如菌液濃度定量、藥敏實(shí)驗(yàn)梯度稀釋、分子生物學(xué)反應(yīng)體系構(gòu)建等關(guān)鍵步驟均依賴精準(zhǔn)移液操作。目前市場(chǎng)上移液器品牌眾多，國(guó)際品牌雖占據(jù)一定份額，但國(guó)產(chǎn)移液器在性能與性價(jià)比上逐漸展現(xiàn)優(yōu)勢(shì)。博清生物科技（南京）有限公司作為國(guó)產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備供應(yīng)商，其單道移液器采用輕量化設(shè)計(jì)與高精度活塞結(jié)構(gòu)，宣稱可滿足科研級(jí)實(shí)驗(yàn)需求，但該產(chǎn)品在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的具體應(yīng)用性能尚未有系統(tǒng)研究。本研究通過(guò)模擬微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的典型操作場(chǎng)景，對(duì)博清生物單道移液器的精度、重復(fù)性及實(shí)驗(yàn)適用性進(jìn)行驗(yàn)證，為實(shí)驗(yàn)室設(shè)備選型提供數(shù)據(jù)參考。

一、材料與方法

（一）實(shí)驗(yàn)材料

1、菌株：大腸桿菌 DH5α（實(shí)驗(yàn)室保存）；

2、試劑：LB液體培養(yǎng)基、LB固體培養(yǎng)基，Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、引物，無(wú)菌去離子水；

3、儀器：博清生物單道移液器，某國(guó)際品牌單道移液器（對(duì)照，同量程規(guī)格），生化培養(yǎng)箱，PCR儀，凝膠成像系統(tǒng)。

（二）實(shí)驗(yàn)方法

1、移液精度與重復(fù)性檢測(cè)

參照《JJG 646-2006 移液器檢定規(guī)程》，選取3個(gè)典型量程，分別使用博清移液器與對(duì)照移液器，吸取無(wú)菌去離子水后，通過(guò)電子分析天平（精度0.1mg）稱重，根據(jù)水的密度換算移液體積，每個(gè)量程重復(fù)測(cè)定10次。計(jì)算平均體積、絕對(duì)誤差及變異系數(shù)，評(píng)估精度與重復(fù)性。

2、菌液梯度稀釋與菌落計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)

將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的大腸桿菌DH5α菌液（初始濃度約10?CFU/mL），使用博清移液器與對(duì)照移液器分別進(jìn)行1 倍梯度稀釋（10?1至10??），每個(gè)稀釋度吸取100μL菌液涂布LB固體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)16h后計(jì)數(shù)菌落數(shù)（CFU/mL）。計(jì)算每個(gè)稀釋度的相對(duì)誤差，比較兩種移液器對(duì)菌液稀釋結(jié)果的影響。

3、PCR反應(yīng)體系構(gòu)建與擴(kuò)增驗(yàn)證

以大腸桿菌16S rRNA基因引物構(gòu)建20μL PCR反應(yīng)體系：10×Buffer 2μL、dNTP 1.6μL、引物各0.8μL、Taq酶0.2μL、模板DNA 1μL、無(wú)菌水13.6μL。分別使用兩種移液器配制10組反應(yīng)體系，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增后通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，分析目標(biāo)條帶（約1500bp）的亮度均一性，評(píng)估移液器對(duì)反應(yīng)體系穩(wěn)定性的影響。

（三）數(shù)據(jù)分析

采用軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果與分析

（一）移液精度與重復(fù)性

博清生物單道移液器在10μL、200μL、1000μL 量程下，平均移液體積與設(shè)定體積的絕對(duì)誤差分別為0.21μL、1.85μL、4.23μL，CV值分別為1.52%、0.87%、0.41%；對(duì)照移液器的絕對(duì)誤差分別為0.18μL、1.62μL、3.95μL，CV值分別為1.36%、0.75%、0.38%。經(jīng)t檢驗(yàn)，兩種移液器在各量程下的平均體積與CV值均無(wú)顯著差異（P>0.05），表明博清移液器具備與國(guó)際品牌相當(dāng)?shù)囊埔壕扰c重復(fù)性。

（二）菌液梯度稀釋與菌落計(jì)數(shù)

菌液稀釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩種移液器在10?1至10??稀釋度下的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果均與理論濃度（基于初始菌液濃度計(jì)算）高度吻合。博清移液器組的相對(duì)誤差范圍為2.1%-4.8%，對(duì)照移液器組為1.8%-4.5%，兩組間無(wú)顯著差異（P>0.05）。其中在10??稀釋度（理論濃度10? CFU/mL）時(shí)，博清組平均菌落數(shù)為987±32 CFU/平板，對(duì)照組為1005±28 CFU/平板，相對(duì)誤差分別為1.3%與0.5%，進(jìn)一步證明博清移液器在微生物定量實(shí)驗(yàn)中可提供穩(wěn)定的稀釋效果。

（三）PCR反應(yīng)體系構(gòu)建與擴(kuò)增驗(yàn)證

PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，兩種移液器配制的10組反應(yīng)體系均成功擴(kuò)增出16S rRNA基因目標(biāo)條帶（1500bp），無(wú)非特異性條帶。通過(guò)凝膠成像系統(tǒng)灰度分析，博清組條帶灰度值的CV值為3.2%，對(duì)照組為2.8%，兩組條帶亮度均一性無(wú)顯著差異（P>0.05），表明博清移液器在微量反應(yīng)體系（20μL）構(gòu)建中可保證試劑配比的準(zhǔn)確性，滿足分子微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)需求。

三、討論

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，移液誤差可能導(dǎo)致菌液濃度誤判、藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差或PCR擴(kuò)增失敗。本研究通過(guò)多維度實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了博清生物單道移液器的性能：在精度方面，其CV值均低于2%，符合科研級(jí)移液器的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（CV<3%）；在實(shí)際應(yīng)用場(chǎng)景中，無(wú)論是宏觀的菌液稀釋計(jì)數(shù)，還是微觀的分子反應(yīng)體系構(gòu)建，均能達(dá)到與國(guó)際品牌相當(dāng)?shù)男Ч?/span>

從產(chǎn)品設(shè)計(jì)角度分析，博清移液器采用的“階梯式活塞密封結(jié)構(gòu)”可能是其維持高精度的關(guān)鍵——該結(jié)構(gòu)可減少吸頭與活塞間的間隙，降低液體殘留量；同時(shí)，其輕量化手柄與防滑指墊設(shè)計(jì)，可減少長(zhǎng)時(shí)間操作導(dǎo)致的手部疲勞，間接提升移液重復(fù)性（實(shí)驗(yàn)中操作人員反饋，連續(xù)1h使用后，博清移液器的操作穩(wěn)定性優(yōu)于部分同價(jià)位國(guó)產(chǎn)產(chǎn)品）。

本研究仍存在一定局限性：僅針對(duì)大腸桿菌單一菌株與16S rRNA基因PCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，未涵蓋真菌、病毒等其他微生物類型，也未涉及更復(fù)雜的微生物實(shí)驗(yàn)（如病毒滴度測(cè)定、酶活定量檢測(cè)）；此外，移液器的長(zhǎng)期耐用性（如1000次以上移液后的性能衰減）尚未納入評(píng)估。后續(xù)可進(jìn)一步拓展實(shí)驗(yàn)范圍，為博清移液器的全面應(yīng)用提供更豐富的數(shù)據(jù)支持。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的單道移液器在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的核心操作中表現(xiàn)出優(yōu)異的移液精度與重復(fù)性，其性能可與國(guó)際知名品牌媲美，且在人體工學(xué)設(shè)計(jì)上具有一定優(yōu)勢(shì)。該移液器可滿足菌液稀釋、培養(yǎng)基分裝、PCR反應(yīng)體系構(gòu)建等常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)需求，為科研實(shí)驗(yàn)室提供高性價(jià)比的國(guó)產(chǎn)設(shè)備選擇，對(duì)推動(dòng)國(guó)產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室儀器的應(yīng)用與發(fā)展具有積極意義。