熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)基于實時熒光信號監(jiān)測核酸擴增過程，可實現(xiàn)病原體的定性與定量分析，具有靈敏度高、特異性強、檢測快速等優(yōu)勢，已成為現(xiàn)代疫病診斷的核心技術(shù)之一。儀器性能是影響qPCR檢測結(jié)果可靠性的關(guān)鍵因素，需具備精準(zhǔn)的溫度控制（升降溫速率、孔間溫度均一性）、穩(wěn)定的熒光檢測系統(tǒng)（激發(fā)光強度、信號采集靈敏度）及便捷的數(shù)據(jù)分析功能。博清生物科技（南京）有限公司作為國內(nèi)領(lǐng)先的分子診斷設(shè)備研發(fā)企業(yè)，其推出的熒光定量PCR儀在溫度控制精度（±0.3℃）、升降溫速率（最大6℃/s）及熒光通道數(shù)量（5通道）等核心參數(shù)上表現(xiàn)優(yōu)異，但該儀器在畜禽疫病診斷中的實際應(yīng)用性能尚未系統(tǒng)驗證。

一、結(jié)果

（一）靈敏度驗證結(jié)果

---博清生物熒光定量PCR儀對3種靶標(biāo)病原體的檢測靈敏度結(jié)果。該儀器對CSFV和AIV的最低檢測限均為10^1 copies/μL，對牛布魯氏菌的最低檢測限為10^2CFU/mL；進口對照儀器的檢測限分別為10^1 copies/μL（CSFV）、10^1 copies/μL（AIV）、10^2 CFU/mL（牛布魯氏菌），兩者靈敏度一致，且均較普通PCR（檢測限10^3 copies/μL/CFU/mL）提升100倍。

（二）特異性驗證結(jié)果

特異性試驗結(jié)果顯示，博清生物熒光定量PCR儀僅對CSFV、AIV（H9）、牛布魯氏菌的模板產(chǎn)生特異性擴增曲線，Ct值在20-30之間；對PRRSV、NDV、大腸桿菌、沙門氏菌、PCV2的模板均無擴增信號（Ct值>40），溶解曲線均為單峰，無雜峰干擾，表明該儀器檢測3種靶標(biāo)疫病的特異性達100%，無交叉反應(yīng)。

（三）重復(fù)性驗證結(jié)果

批內(nèi)與批間重復(fù)性試驗的Ct值變異系數(shù)（CV）結(jié)果--。博清生物熒光定量PCR儀檢測高、中、低3個濃度標(biāo)準(zhǔn)品的批內(nèi)CV為1.2%-2.8%，批間CV為1.5%-3.0%，均<5%；進口對照儀器的批內(nèi)CV為1.0%-2.5%，批間CV為1.3%-2.7%，兩者穩(wěn)定性無顯著差異（P>0.05），表明博清生物熒光定量PCR儀檢測結(jié)果具有良好的重復(fù)性。

（四）臨床樣本檢測結(jié)果

200份臨床疑似樣本的檢測結(jié)果--。博清生物熒光定量PCR儀檢測CSFV的陽性符合率為96.7%（29/30）、陰性符合率為97.1%（49/50）、總符合率為96.9%（78/80）；檢測AIV（H9）的陽性符合率為95.2%（20/21）、陰性符合率為97.9%（47/48）、總符合率為95.7%（67/70）；檢測牛布魯氏菌的陽性符合率為94.4%（17/18）、陰性符合率為97.5%（31/32）、總符合率為96.0%（48/50）。此外，博清生物熒光定量PCR儀單樣本檢測周期（從核酸提取到結(jié)果分析）為2.0-2.5小時，而傳統(tǒng)病原分離培養(yǎng)法需3-5天，檢測效率顯著提升。

二、討論

畜禽疫病的早期精準(zhǔn)診斷是防控工作的核心，而檢測儀器的性能直接決定診斷效率與準(zhǔn)確性。本研究從方法學(xué)驗證與臨床應(yīng)用兩個維度，系統(tǒng)評估了博清生物熒光定量PCR儀在畜禽疫病診斷中的價值，其優(yōu)勢主要體現(xiàn)在以下三方面：

（一）高靈敏度與特異性，滿足早期診斷需求

博清生物熒光定量PCR儀對CSFV、AIV（H9）、牛布魯氏菌的檢測限低至10^1 copies/μL 或10^2 CFU/mL，可檢出感染早期（如豬瘟病毒感染后24小時、禽流感病毒感染后12小時）的低載量樣本，而傳統(tǒng)ELISA方法通常需待病原體載量達到10^3 copies/μL以上才能檢出。此外，該儀器通過5通道熒光檢測與特異性探針設(shè)計，有效避免了非靶標(biāo)病原體的交叉反應(yīng)，溶解曲線無雜峰，確保了診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，可減少因假陽性導(dǎo)致的“過度防控”或假陰性導(dǎo)致的“疫病擴散”風(fēng)險。

（二）高穩(wěn)定性與便捷性，適配基層實驗室應(yīng)用

基層畜牧獸醫(yī)實驗室是畜禽疫病監(jiān)測的“第一道防線”，對儀器的穩(wěn)定性與操作便捷性要求較高。本研究中，博清生物熒光定量PCR儀的批內(nèi)與批間CV均<3%，溫度控制精度達±0.3℃，即使在連續(xù)高強度檢測（每日檢測100份樣本）下，仍能保持結(jié)果穩(wěn)定；其配套的數(shù)據(jù)分析軟件可自動生成檢測報告（含Ct值、溶解曲線、定量結(jié)果），無需專業(yè)人員手動計算，操作門檻低于進口儀器。此外，該儀器的耗材兼容性強，可適配國內(nèi)主流品牌的qPCR試劑，檢測成本較進口儀器降低30%-40%，更適合我國基層實驗室的經(jīng)濟需求。

（三）快速高效，支撐應(yīng)急防控決策

在畜禽疫病暴發(fā)場景中，檢測速度直接影響防控措施的時效性。博清生物熒光定量PCR儀的單樣本檢測周期僅2.5小時，可實現(xiàn)“樣本接收-結(jié)果報告”的當(dāng)日完成，而傳統(tǒng)病原分離培養(yǎng)法需3-5天，易錯過最佳防控窗口。例如，在本研究中某規(guī)?；i場的疑似豬瘟樣本檢測中，博清儀器在2小時內(nèi)確診12份陽性樣本，養(yǎng)殖場據(jù)此及時隔離病豬、消毒環(huán)境，將疫情控制在單個豬舍內(nèi)，避免了全群感染；若采用傳統(tǒng)方法，可能導(dǎo)致疫情擴散，經(jīng)濟損失增加50%以上。

本研究仍存在一定局限性：僅針對3種常見畜禽疫病建立了檢測方法，后續(xù)需擴展至豬藍(lán)耳病、禽新城疫、牛結(jié)核病等更多疫病；臨床樣本來源集中于華北、華東地區(qū)，需在全國范圍內(nèi)擴大樣本量以驗證儀器的區(qū)域適用性。此外，可進一步開發(fā)基于該儀器的“多重qPCR檢測方法”，實現(xiàn)單管同時檢測多種病原體，提升檢測效率。

本研究證實，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光定量PCR儀在畜禽疫病診斷中具備高靈敏度、高特異性、高穩(wěn)定性及快速高效的優(yōu)勢，其性能與進口同類儀器相當(dāng)，且在成本控制與操作便捷性上更具競爭力。該儀器可有效應(yīng)用于豬瘟、禽流感、布魯氏菌病等畜禽疫病的早期診斷、流行病學(xué)監(jiān)測及應(yīng)急防控，為農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)領(lǐng)域的畜禽疫病防控提供可靠技術(shù)支撐，對保障我國畜牧業(yè)健康發(fā)展與公共衛(wèi)生安全具有重要意義。

未來可通過拓展檢測病種、開發(fā)多重檢測方法、優(yōu)化基層應(yīng)用流程等方式，進一步發(fā)揮博清生物熒光定量PCR儀的應(yīng)用價值，推動我國畜禽疫病診斷技術(shù)向“國產(chǎn)化、精準(zhǔn)化、高效化”方向發(fā)展。