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近年來，猴痘、新型冠狀病毒等傳染病的全球流行凸顯了公共衛(wèi)生應(yīng)急體系中早期篩查的關(guān)鍵作用。傳染病的快速傳播依賴于隱匿感染期的病毒擴(kuò)散，而早期精準(zhǔn)檢出是切斷傳播鏈、降低防控成本的核心環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)檢測(cè)方法如膠體金層析、常規(guī)PCR存在靈敏度不足、檢測(cè)周期長或操作復(fù)雜等局限，難以滿足疫情防控中“早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早處置”的要求。

熒光定量PCR技術(shù)憑借實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)核酸擴(kuò)增過程的優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)了病原體的精準(zhǔn)定量與快速檢測(cè)，已成為傳染病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。博清生物科技（南京）有限公司針對(duì)公共衛(wèi)生場(chǎng)景需求研發(fā)的熒光定量PCR儀，融合了快速溫控、高靈敏度檢測(cè)及便攜設(shè)計(jì)等特性，適配移動(dòng)實(shí)驗(yàn)室、基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)及現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)急檢測(cè)等多元場(chǎng)景。

一、材料與方法

（一）儀器與試劑

1、檢測(cè)儀器：博清生物熒光定量PCR儀；對(duì)照儀器為某產(chǎn)品實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

2、試劑耗材：病毒/細(xì)菌核酸提取試劑盒，SYBR Green I熒光染料，特異性引物探針，標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒。

（二）檢測(cè)對(duì)象

標(biāo)準(zhǔn)品：金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC），猴痘病毒、HBV、HPV標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒（濃度10?拷貝/μl）。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

1、核酸提取

參照試劑盒說明書處理樣本，病毒樣本采用硅膠膜吸附法提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；細(xì)菌樣本采用蛋白酶K消化-乙醇沉淀法提取DNA，經(jīng)驗(yàn)證核酸純度后備用。

2、PCR 反應(yīng)體系與條件

反應(yīng)體系20μl：含10μl 2×PCR SuperMix，上下游引物各0.5μl（終濃度 0.2μmol/L），探針0.3μl（終濃度0.15μmol/L），模板核酸2μl，無核酸酶水補(bǔ)至體積。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5分鐘；95℃變性15秒，60℃退火延伸1分鐘，40個(gè)循環(huán)，退火階段同步采集熒光信號(hào)。

3、性能評(píng)估指標(biāo)

靈敏度：對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行10倍梯度稀釋（101-10?拷貝/μl），檢測(cè)最低檢出限；

特異性：交叉檢測(cè)非目標(biāo)病原體（真菌、支原體、無關(guān)病毒），驗(yàn)證無交叉反應(yīng)；

時(shí)效性：記錄單輪檢測(cè)全程耗時(shí)，評(píng)估批量樣本處理效率；

現(xiàn)場(chǎng)適用性：在移動(dòng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下（溫度15-35℃），對(duì)模擬疫情樣本進(jìn)行快速篩查，統(tǒng)計(jì)陽性檢出率。

二、結(jié)果

（一）檢測(cè)靈敏度與特異性

博清生物熒光定量PCR儀對(duì)細(xì)菌類病原體（金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌）的最低檢出限為103拷貝/μl，血液樣本中細(xì)菌污染檢出限達(dá)10?CFU/ml，與文獻(xiàn)報(bào)道的熒光定量PCR技術(shù)最優(yōu)水平一致；對(duì)病毒類病原體（猴痘病毒、HBV、HPV）的檢測(cè)下限為20IU/mL，低病毒載量樣本（<50IU/mL）陽性檢出率達(dá)85%，顯著高于傳統(tǒng)RT-PCR（70%）（P<0.05）。特異性檢測(cè)顯示，儀器僅對(duì)目標(biāo)病原體產(chǎn)生特異性熒光信號(hào)，與真菌、支原體及無關(guān)病毒無交叉反應(yīng)，特異性達(dá)98.6%。

（二）檢測(cè)時(shí)效性

該儀器憑借≥5.0℃/s的快速升降溫性能，單輪檢測(cè)全程耗時(shí)45-55分鐘，較傳統(tǒng)熒光定量PCR儀（60-90分鐘）縮短25%-30%。多通量設(shè)計(jì)支持批量樣本并行處理，每小時(shí)可完成多份樣本檢測(cè)，滿足大規(guī)模篩查需求。

（三）現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用效果

在模擬疫情現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)急篩查中，移動(dòng)實(shí)驗(yàn)室搭載博清生物熒光定量PCR儀對(duì)100份疑似樣本進(jìn)行檢測(cè)，全程耗時(shí)短，陽性檢出率為23%，與后續(xù)實(shí)驗(yàn)室確診結(jié)果一致性達(dá)97.8%。儀器輕巧便攜的設(shè)計(jì)適配基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)及口岸檢疫場(chǎng)景，無需專業(yè)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境即可開展檢測(cè)，操作流程經(jīng)簡單培訓(xùn)即可掌握。

三、討論

傳染病早期篩查的核心需求是“快速、精準(zhǔn)、可及”，這三大要素直接決定疫情防控的響應(yīng)效率與控制效果。博清生物熒光定量PCR儀通過技術(shù)優(yōu)化，全面契合公共衛(wèi)生防控的實(shí)際需求，其應(yīng)用價(jià)值主要體現(xiàn)在以下方面：

（一）技術(shù)性能適配早期篩查需求

高靈敏度是早期檢出隱匿性感染的關(guān)鍵。該儀器采用高靈敏度傳感器及長壽命LED光源，結(jié)合4色獨(dú)立熒光通道設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)低拷貝病原體的精準(zhǔn)捕獲，檢測(cè)限達(dá)到103拷貝/μl的行業(yè)先進(jìn)水平。在HBV、HPV等傳染病檢測(cè)中，其對(duì)低病毒載量樣本的高檢出率，能有效避免傳統(tǒng)方法的漏診問題，為感染者早期干預(yù)提供可能?？焖偕禍丶夹g(shù)（≥5.0℃/s）將單輪檢測(cè)時(shí)間壓縮至1小時(shí)內(nèi)，解決了傳統(tǒng)PCR檢測(cè)耗時(shí)過長導(dǎo)致的防控滯后問題，尤其適用于疫情暴發(fā)時(shí)的大規(guī)?？焖俜至骱Y查。

（二）場(chǎng)景適配性提升公共衛(wèi)生服務(wù)覆蓋面

公共衛(wèi)生防控不僅需要核心實(shí)驗(yàn)室的精準(zhǔn)檢測(cè)，更需要基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)、口岸檢疫、移動(dòng)篩查車等多元場(chǎng)景的快速響應(yīng)能力。博清生物熒光定量PCR儀的輕巧便攜設(shè)計(jì)（無需連接PC即可獨(dú)立運(yùn)行）、10寸直觀觸控界面，以及寬溫域適應(yīng)能力，使其能脫離專業(yè)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境開展工作。在猴痘疫情防控中，類似的便攜PCR設(shè)備已被證實(shí)能有效提升多部位樣本檢測(cè)的時(shí)效性，為接觸者分級(jí)管理提供快速依據(jù)。這種場(chǎng)景適配性大幅拓展了熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用邊界，使優(yōu)質(zhì)檢測(cè)資源下沉至基層，助力構(gòu)建“早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早處置”的防控網(wǎng)絡(luò)。

（三）成本效益優(yōu)化公共衛(wèi)生資源配置

相較于傳統(tǒng)大型PCR儀，博清生物熒光定量PCR儀在保證檢測(cè)性能的同時(shí)，具備更高的成本效益優(yōu)勢(shì)。16通量設(shè)計(jì)平衡了檢測(cè)效率與設(shè)備投入，免維護(hù)LED光源降低了后期運(yùn)營成本，適合資源有限的基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)批量配置。在HPV高危人群篩查等公共衛(wèi)生項(xiàng)目中，熒光定量PCR技術(shù)已被證實(shí)能顯著提升篩查準(zhǔn)確性，降低宮頸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，而博清生物儀器的高性價(jià)比特性，為這類普惠性篩查項(xiàng)目的規(guī)?；茝V提供了可能。

本研究存在一定局限性：檢測(cè)的病原體種類仍需擴(kuò)展，臨床樣本量可進(jìn)一步擴(kuò)大以驗(yàn)證不同地區(qū)、不同人群的適用性；未來可探索該儀器與核酸提取自動(dòng)化設(shè)備的聯(lián)用，進(jìn)一步提升檢測(cè)效率。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光定量PCR儀憑借高靈敏度、強(qiáng)特異性、快速檢測(cè)及便攜易用的綜合性能，在傳染病早期篩查中展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)。其不僅能精準(zhǔn)捕獲低拷貝病原體，滿足隱匿性感染與早期感染的檢測(cè)需求，還能適配多元公共衛(wèi)生場(chǎng)景，推動(dòng)檢測(cè)資源下沉，為疫情防控的快速響應(yīng)與精準(zhǔn)施策提供關(guān)鍵技術(shù)支撐。該儀器在病毒與細(xì)菌類傳染病篩查中的穩(wěn)定表現(xiàn)，使其具備成為公共衛(wèi)生應(yīng)急體系核心檢測(cè)設(shè)備的潛力，值得在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)、口岸檢疫、疫情應(yīng)急響應(yīng)等場(chǎng)景中推廣應(yīng)用。